移液器的檢測(cè)和校準(zhǔn)

（一）氣密性檢測(cè)

移液器吸滿液體后，手持垂直放置15s，檢查吸嘴的尖頭有無(wú)液滴，如有，則說(shuō)明漏氣。

（二）準(zhǔn)確性檢測(cè)

1）量程小于1μl，建議使用分光光度法檢測(cè)。將移液器調(diào)至目標(biāo)體積，然后移取染料溶液，加入一定體積的蒸餾水中，測(cè)定溶液的稀釋度（334nm或340nm），重復(fù)幾次移液操作，計(jì)算移液器的度。

2）量程大于1μl，可以用稱重法檢測(cè)。通過(guò)對(duì)水的稱重，轉(zhuǎn)換成體積（體積=質(zhì)量/密度），鑒別移液器的準(zhǔn)確性。由于水的密度是隨著溫度變化而變化，且稱量天平本身度不符合檢測(cè)要求，檢測(cè)又大多在一個(gè)開放式空間內(nèi)操作，偏差在所難免。因而，此種稱量法只能現(xiàn)場(chǎng)粗略地判斷移液器的準(zhǔn)確性，進(jìn)一步的校準(zhǔn)必須在專業(yè)的實(shí)驗(yàn)室操作進(jìn)行。

注意：稱重法實(shí)驗(yàn)室*條件是高度靈敏的分析天平（定期校準(zhǔn)）、雙蒸水和稱量容器。水、移液器和吸嘴必須具有相同的溫度（20℃時(shí)水的密度為0.09982）。

二、專業(yè)校準(zhǔn)

移液器的工作量大，長(zhǎng)期使用，將會(huì)使彈簧彈力發(fā)生變形，加之本身是塑料，不耐磨擦，就會(huì)產(chǎn)生誤差。為了保證移液器傳遞液體量的準(zhǔn)確性，必須對(duì)移液器進(jìn)行定期校準(zhǔn)。為了更好地發(fā)揮該類計(jì)量?jī)x器的作用，對(duì)新購(gòu)進(jìn)的儀器要進(jìn)行校準(zhǔn)才能使用；對(duì)正在使用的計(jì)量?jī)x器，由于長(zhǎng)期使用會(huì)造成其示值于度量對(duì)象的誤差，這種誤差若不進(jìn)行控制，及時(shí)校正，必定會(huì)影響科研工作。因此，對(duì)使用的移液器要定期檢定、校正，并建立檔案，只有這樣才能使其在日常工作中更好的發(fā)揮作用。

目前，在許多實(shí)驗(yàn)室條件下進(jìn)行的常規(guī)檢測(cè)并不能*取代專業(yè)的校準(zhǔn)工作，因?yàn)樾?zhǔn)對(duì)于外部環(huán)境、工作條件及使用的精密儀器具有較高的技術(shù)要求，而這些條件往往是大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室無(wú)法提供的。現(xiàn)在一些大型的移液器制造商均采用統(tǒng)一的移液器標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范，利用專業(yè)軟件校正系統(tǒng)，通過(guò)計(jì)算機(jī)對(duì)分析天平進(jìn)行在線控制，測(cè)量、數(shù)據(jù)采集、計(jì)算、結(jié)果評(píng)價(jià)等環(huán)節(jié)由軟件控制完成，所有人為操作都被計(jì)算機(jī)記錄隨報(bào)告打印出來(lái)，采用電腦對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行評(píng)估認(rèn)證，*排除了人為操縱校準(zhǔn)結(jié)果的可能性，并制定當(dāng)?shù)卮砩烫峁I(yè)的校準(zhǔn)和維修服務(wù)。下面以Eppendorf公司為例，介紹其專業(yè)校準(zhǔn)操作。

（一）校準(zhǔn)的基本操作條件

操作室：獨(dú)立房間，顯示溫度和濕度狀態(tài)。

溫度控制：15~30℃（±0.5℃）

濕度控制：60%~90%

工作臺(tái)面：防震、防塵、遠(yuǎn)離熱源、無(wú)陽(yáng)光直射。

天平：0.000 01g精密分析天平（小數(shù)點(diǎn)后5位），每年需由廠家進(jìn)行校準(zhǔn)。

防蒸發(fā)裝置：Eppendorf提供的濕度阱，防止稱量液體的揮發(fā)。

測(cè)試介質(zhì)：雙蒸水，每4h更換一次，批次更換周期不大于2周。

（二）操作過(guò)程

1）同溫化處理：校正前，所有移液器及校正介質(zhì)（如工作臺(tái)、天平、雙蒸水等）置于相同操作間至少4h，以確保它們具有相同的溫度。

2）內(nèi)外部清洗。

3）潤(rùn)滑活塞。

4）校準(zhǔn)：采用三點(diǎn)校準(zhǔn)法，即根據(jù)移液器量程范圍，選取zui低量程、中間值和zui高量程三點(diǎn)分別測(cè)試10次，各個(gè)測(cè)試點(diǎn)取其平均值，計(jì)算其準(zhǔn)確度（inaccuracy）和度（imprecision），評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)符合DIN 12650要求。

5）  校準(zhǔn)報(bào)告：可根據(jù)客戶需求提供給算計(jì)打印的標(biāo)準(zhǔn)報(bào)告或PICASO校正報(bào)告，符合ISO、DIN或ASTM相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。

三、影響準(zhǔn)確性的因素

1）操作錯(cuò)誤：包括30℃手持式移液器吸液；與吸嘴不匹配，較易造成脫落；殘留的試劑倒流，污染活塞和密封圈；快速吸液排液，導(dǎo)致部分液體殘留在吸頭上等都會(huì)影響準(zhǔn)確性。

2）移液器損壞：包括移液器的頭部被刮擦，斷裂受損；活塞受污染；彈簧受腐蝕等。

3）操作條件的影響：包括未作調(diào)整吸取與水不同密度的液體；樣品和移液器的差別太大等。